Reflection about the hemodialysis water microbiological quality in Brazil

Abstract Dialysis has been widely used in the treatment of patients with chronic kidney diseases and is considered a global public health issue. This treatment, which has changed the prognosis and quality of life in patients with chronic renal failure, can lead to complications that are often fatal. For this reason, there is a need for validation of alternative tests that favor the monitoring of treated water for dialysis in real-time to promote and prevent injuries to patients submitted to this procedure.

Cálculo da estimativa da incerteza de medição associada ao ensaio de contagem de bactérias heterotróficas em matriz água purificada através da técnica de detecção por fluorescência / Measurement uncertainty calculation associated with heterotrophic bacterial count in purified water matrix using the fluorescence detection technique

A incerteza de medição representa o nível de confiança no resultado. Para a estimativa da incerteza de medição foi empregado o cálculo do desvio padrão da reprodutibilidade intralaboratorial de 48 ensaios de contagem de bactérias heterotróficas pela técnica da membrana filtrante com detecção por fluorescência pelo uso de substrato fluorogênico em amostras de água purificada contaminadas artificialmente entre 10 e 100 UFC/mL. O valor obtido, 1,3 x 10-3 (log10), indica que a técnica utilizada pode ser uma alternativa para a estimativa da incerteza de medição em ensaios microbiológicos quantitativos de contagem de bactérias heterotróficas em amostras de água purificada. (AU)

Measurement uncertainty represents the confidence level in the result. To estimate the expanded measurement uncertainty, the standard deviation of intra-laboratory reproducibility of 48 heterotrophic bacterial count assays by fluorescence detection by the use of fluorogenic substrate on artificially contaminated purified water samples between 10 and 100 CFU/mL was used. The value obtained, 1.3 x 10-3 (log10), indicates that the technique used can be an alternative to estimate measurement uncertainty in quantitative microbiological heterotrophic bacterial count assays in purified water samples using fluorogenic substrate. (AU)

Cálculo da estimativa da incerteza de medição associada ao ensaio de contagem de bactérias heterotróficas em matriz água purificada através da técnica de detecção por fluorescência / Measurement uncertainty calculation associated with heterotrophic bacterial count in purified water matrix using the fluorescence detection technique

A incerteza de medição representa o nível de confiança no resultado. Para a estimativa da incerteza de medição foi empregado o cálculo do desvio padrão da reprodutibilidade intralaboratorial de 48 ensaios de contagem de bactérias heterotróficas pela técnica da membrana filtrante com detecção por fluorescência pelo uso de substrato fluorogênico em amostras de água purificada contaminadas artificialmente entre 10 e 100 UFC/mL. O valor obtido, 1,3 x 10-3 (log10), indica que a técnica utilizada pode ser uma alternativa para a estimativa da incerteza de medição em ensaios microbiológicos quantitativos de contagem de bactérias heterotróficas em amostras de água purificada.

Measurement uncertainty represents the confidence level in the result. To estimate the expanded measurement uncertainty, the standard deviation of intra-laboratory reproducibility of 48 heterotrophic bacterial count assays by fluorescence detection by the use of fluorogenic substrate on artificially contaminated purified water samples between 10 and 100 CFU/mL was used. The value obtained, 1.3 x 10-3 (log10), indicates that the technique used can be an alternative to estimate measurement uncertainty in quantitative microbiological heterotrophic bacterial count assays in purified water samples using fluorogenic substrate.

Is dialysis water a safe component for hemodialysis treatment in São Paulo State, Brazil?

Failure on the water treatment poses hemodialysis patients at risk of injury and death. Identifying if the patients are exposed to water quality related microbiological risks is an important objective to reduce the mortality for chronic renal patients and is the main issue of this study. We evaluated the microbiological water quality used by 205 dialysis services in São Paulo State, Brazil between 2010 to 2016. The study included heterotrophic bacteria count, total coliforms research, and bacterial endotoxin determination in 1366 dialysis water samples. The number of unsatisfactory clinics for at least one microbiological parameter decreased 16.0% between 2010 to 2015 but increased 57.2% in 2016. In 2010, the most frequent unsatisfactory parameter was related to heterotrophic bacteria count (54.8%) followed by endotoxin determination (45.2%). However, in 2013 an opposite situation was observed: endotoxin determination as the parameter of the higher incidence of nonconformities. Total coliform was verified at a lower frequency. We highlighted the importance of regular monitoring of dialysis water quality to prevent infections caused by dialytic procedures and to ensure that the water is a safe component of the treatment.

Is dialysis water a safe component for hemodialysis treatment in São Paulo State, Brazil?

Failure on the water treatment poses hemodialysis patients at risk of injury and death. Identifying if the patients are exposed to water quality related microbiological risks is an important objective to reduce the mortality for chronic renal patients and is the main issue of this study. We evaluated the microbiological water quality used by 205 dialysis services in São Paulo State, Brazil between 2010 to 2016. The study included heterotrophic bacteria count, total coliforms research, and bacterial endotoxin determination in 1366 dialysis water samples. The number of unsatisfactory clinics for at least one microbiological parameter decreased 16.0% between 2010 to 2015 but increased 57.2% in 2016. In 2010, the most frequent unsatisfactory parameter was related to heterotrophic bacteria count (54.8%) followed by endotoxin determination (45.2%). However, in 2013 an opposite situation was observed: endotoxin determination as the parameter of the higher incidence of nonconformities. Total coliform was verified at a lower frequency. We highlighted the importance of regular monitoring of dialysis water quality to prevent infections caused by dialytic procedures and to ensure that the water is a safe component of the treatment.

Evaluation of an Amplified ATP Bioluminescence Method for Rapid Sterility Testing of Large Volume Parenteral

The sterility test described in pharmacopoeial compendia requires a 14-day incubation period to obtain a valid analytical result. Therefore, the use of alternative methods to evaluate the sterility of pharmaceuticals, such as the BacT/Alert® 3D system, is particularly interesting, because it allows a reduced incubation period and lower associated costs. Considering that the BacT/Alert® 3D system offers several culture media formulations developed for this microbial detection system, the present study was aimed to evaluate and compare the performance of BacT/Alert® 3D with the pharmacopoeial sterility test. There was no significant difference between the ability of the culture media to allow detection of microbial contamination. However, the rapid sterility testing method allowed a more rapid detection of the challenge microorganisms, which indicates that the system is a viable alternative for assessing the sterility of injectable products.

Performance Survey and Comparison Between Rapid Sterility Testing Method and Pharmacopoeia Sterility Test

The sterility test described in pharmacopoeial compendia requires a 14-day incubation period to obtain a valid analytical result. Therefore, the use of alternative methods to evaluate the sterility of pharmaceuticals, such as the BacT/Alert® 3D system, is particularly interesting, because it allows a reduced incubation period and lower associated costs. Considering that the BacT/Alert® 3D system offers several culture media formulations developed for this microbial detection system, the present study was aimed to evaluate and compare the performance of BacT/Alert® 3D with the pharmacopoeial sterility test. There was no significant difference between the ability of the culture media to allow detection of microbial contamination. However, the rapid sterility testing method allowed a more rapid detection of the challenge microorganisms, which indicates that the system is a viable alternative for assessing the sterility of injectable products.

Validação de metodologia analítica para determinação de endotoxina bacteriana em água para diálise por meio de método cromogênico cinético / Analytical methodology validation for determining the bacterialendotoxin in the dialysis water by means of kinetic chromogenic technique

O nível de endotoxina presente na água tratada para hemodiálise é um importante indicador dequalidade, uma vez que altas concentrações de endotoxina atuam como a principal fonte de inflamaçãocrônica em pacientes submetidos à diálise. Este estudo visa validar o método analítico para determinarquantitativamente a endotoxina bacteriana em amostras de água de hemodiálise pelo métodocromogênico cinético e de comparar com o método de coagulação em gel. Os ensaios pelo métodode coagulação em gel foram realizados de acordo com a Farmacopeia Brasileira em três amostrasde água de hemodiálise. A validação do método cromogênico cinético foi realizada utilizando-se asmesmas amostras por meio de sistema de teste portátil. As médias geométricas das concentrações dospontos finais obtidos nos testes de confirmação de sensibilidade LAL e de interferência por métodode coagulação em gel apresentaram resultado de 0,125 UE/mL. Os resultados obtidos pelo métodocromogênico para a recuperação do controle positivo do produto variaram de 89 a 186% e o coeficientede variação de 2,5 a 18,2%, demonstrando que as amostras não apresentaram interferência. Foramobtidos resultados equivalentes em ambos os métodos, o que permite a implementação do método emlaboratórios de saúde pública.

The occurrence of endotoxin in the treated water for hemodialysis is an important indicator of quality,since high concentrations of endotoxin constitute the main source for causing chronic inflammationin patients undergoing dialysis. This study aims at validating the analytical method for determiningquantitatively the bacterial endotoxin in hemodialysis water samples. The data from the kineticchromogenic method were compared with the results obtained from the gel coagulation technique.The gel coagulation assays were performed in three samples of hemodialysis water, according to theBrazilian Pharmacopoeia. The validation of the kinetic chromogenic method was performed usingthe same samples through the portable test system. The geometric means of the concentrations ofthe endpoints obtained from the tests for confirming the LAL sensitivity and the interference by gelcoagulation method showed a result of 0.125 EU/mL. The results obtained by the chromogenic methodfor recovering the product positive control varied from 89 to 186% and the coefficient of variationfrom 2.5 to 18.2%, demonstrating that the samples did not show interference. Equivalent results wereobtained in both methods, therefore being viable the implementation of this methodology in the publichealth laboratories.

Validação de metodologia analítica para determinação de endotoxina bacteriana em água para diálise por meio de método cromogênico cinético / Analytical methodology validation for determining the bacterial endotoxin in the dialysis water by means of kinetic chromogenic technique

O nível de endotoxina presente na água tratada para hemodiálise é um importante indicador de qualidade, uma vez que altas concentrações de endotoxina atuam como a principal fonte de inflamação crônica em pacientes submetidos à diálise. Este estudo visa validar o método analítico para determinar quantitativamente a endotoxina bacteriana em amostras de água de hemodiálise pelo método cromogênico cinético e de comparar com o método de coagulação em gel. Os ensaios pelo método de coagulação em gel foram realizados de acordo com a Farmacopeia Brasileira em três amostras de água de hemodiálise. A validação do método cromogênico cinético foi realizada utilizando-se as mesmas amostras por meio de sistema de teste portátil. As médias geométricas das concentrações dos pontos finais obtidos nos testes de confirmação de sensibilidade LAL e de interferência por método de coagulação em gel apresentaram resultado de 0,125 UE/mL. Os resultados obtidos pelo método cromogênico para a recuperação do controle positivo do produto variaram de 89 a 186% e o coeficiente de variação de 2,5 a 18,2%, demonstrando que as amostras não apresentaram interferência. Foram obtidos resultados equivalentes em ambos os métodos, o que permite a implementação do método em laboratórios de saúde pública.

The occurrence of endotoxin in the treated water for hemodialysis is an important indicator of quality, since high concentrations of endotoxin constitute the main source for causing chronic inflammation in patients undergoing dialysis. This study aims at validating the analytical method for determining quantitatively the bacterial endotoxin in hemodialysis water samples. The data from the kinetic chromogenic method were compared with the results obtained from the gel coagulation technique. The gel coagulation assays were performed in three samples of hemodialysis water, according to the Brazilian Pharmacopoeia. The validation of the kinetic chromogenic method was performed using the same samples through the portable test system. The geometric means of the concentrations of the endpoints obtained from the tests for confirming the LAL sensitivity and the interference by gel coagulation method showed a result of 0.125 EU/mL. The results obtained by the chromogenic method for recovering the product positive control varied from 89 to 186% and the coefficient of variation from 2.5 to 18.2%, demonstrating that the samples did not show interference. Equivalent results were obtained in both methods, therefore being viable the implementation of this methodology in the public health laboratories.

Evaluation of in vitro biological properties of Senna occidentalis (L) Link / Avaliação in vitro de propriedades biológicas de Senna occidentalis (L) Link

Senna species have been widely used by American, African and Indian ethic groups mainly in the treatment of feebleness, constipation, liver disorders and skin infections. Senna occidentalis (L.) Link is a perennial shrub native to South America and indigenous to tropical regions throughout the world. Current study evaluated the antimicrobial activity of aqueous and hydroalcoholic extracts from S. occidentalis prepared from different parts of the plant. Antimicrobial activity was assessed against standard pharmaceutical microorganisms by spectrophotometry and microdilution technique. Escherichia coli was sensitive only to compounds extracted from seeds which may be proteinaceous. A broader antimicrobial spectrum was demonstrated by the hydroalcoholic extract of seeds, mostly against Pseudomonas aeruginosa. The in vitro toxicity using mouse fibroblasts indicated that the extract might be a biocompatible ingredient for topical formulations, while the hydroalcoholic extract of aerial parts demonstrated to be potentially cytotoxic.

Espécies de Senna são amplamente utilizadas por tribos americanas, africanas e indianas, principalmente para tratar a fraqueza, a constipação, as desordens do fígado e também em preparações tópicas para infecções de pele. A Senna occidentalis (L.) Link é um arbusto perene nativo da América do Sul encontrado em regiões tropicais. Este trabalho avaliou a atividade antimicrobiana de extratos aquosos e hidroalcoólicos de diferentes partes da planta. A atividade antimicrobiana foi estabelecida frente aos microrganismos padrões farmacêuticos por espectrofotometria e técnica de microdiluição. A Escherichia coli apresentou sensibilidade apenas a componentes extraídos das sementes, os quais podem ser de natureza proteica. O espectro mais amplo de atividade antimicrobiana foi obtido com o extrato hidroalcoólico das sementes, principalmente contra Pseudomonas aeruginosa. A toxicidade in vitro utilizando fibroblastos de camundongo indicou que este extrato pode ser um ingrediente biocompatível para formulações de uso tópico. Já o extrato hidroalcoólico de partes aéreas demonstrou ser potencialmente citotóxico.

Critical evaluation of the off-label indication and of the risks associated to the use of multi-dose vials on the treatment of age-related macular degeneration

Age-related macular degeneration (AMD) is an ocular inflammatory diseases treated mainly by means of a bevacizumab (Avastin®) or ranibizumab (Lucentis®) intravitreal injection. Among these drugs, only ranibizumab has a specific therapeutic indication for AMD. Considering that, the off-label use on ophthalmic therapy seems to become a rule when it should be an exception. Furthermore, bevacizumab presentation consists of multi-dose vials although it does not contain preservatives in its formula. The current literature review aimed at assessing the risks for the patient related to the use of off-label indication and multi-dose vials on AMD treatment. Considering this, the proposal related to the Brazilian Public Consultation no.10, dated September 12, 2012, which proposes the Clinical Protocol and Therapeutic Guidelines for AMD treatment, was evaluated. This systematic review allowed to conclude that the bevacizumab off-label indication results in increased risks for the patient when compared to the product with specific therapeutic indication for AMD treatment (ranibizumab), especially referring to the significant raise in the adverse events. The risks for the patient related to the multi-dose vial use, referring to the microbiological stability and dose precision, were also made clear.

A degeneração macular relacionada à idade (DMRI) é uma doença ocular inflamatória tratada principalmente por injeção intravítrea de bevacizumabe (Avastin®) ou de ranibizumabe (Lucentis®). Entre os medicamentos citados, apenas o ranibizumabe tem indicação terapêutica específica para uso oftálmico. Considerando essa realidade, o uso off-label na terapia oftálmica parece constituir regra quando deveria ser exceção. Ademais, a apresentação do bevacizumabe consiste em frascos de múltipla-dose, embora esse medicamento não contenha conservante em sua fórmula. A presente revisão da literatura avaliou os riscos ao paciente relativos ao uso indicado off-label e de frascos de múltipla-dose no tratamento de DMRI. Nesse sentido, avaliou-se a proposta relativa à Consulta Pública Brasileira nº 10, de 12 de setembro de 2012, que propõe o Protocolo Clínico e Diretrizes Terapêuticas para o tratamento de DMRI. O levantamento sistemático de trabalhos científicos e de informações relevantes de banco de dados eletrônicos permitiu concluir que a indicação off-label do bevacizumabe acarreta riscos maiores ao paciente, quando comparado ao produto com indicação terapêutica específica para o tratamento de DMRI (ranibizumabe), especialmente quanto ao aumento significativo de eventos adversos. Evidenciaram-se, também, os riscos ao paciente relativos ao uso de frascos de múltipla-dose, quanto à estabilidade microbiológica e à precisão da dose.

Equivalência Farmacêutica de produtos oncológicos comercializados no Brasil / Pharmaceutical equivalence of oncology products marketed in Brazil

The aim of this work was to assess pharmaceutical equivalence among medicinal products containing cisplatin, doxorubicin hydrochloride and paclitaxel that are marketed in Brazil by various manufacturers. We analyzed 14 lots of cisplatin injectable solution from 4 manufacturers (Labs B, C, H and I), 15 lots of doxorubicin hydrochloride injectable lyophilized powder from 5 manufacturers (Labs C, F, G, H and J) and 38 lots of paclitaxel injectable solution from 8 manufacturers (Labs A, B, C, D, E, F, G and H). All products complied with the criteria established in the Brazilian and American pharmacopoeias. The assay results for contents of cisplatin, doxorubicin hydrochloride and paclitaxel were 94.3-105.9%, 97.1-106.6% and 90.2-109.4%, respectively. Statistical analysis showed that the same products from the various manufacturers were equivalent.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a equivalência farmacêutica entre medicamentos de diferentes fabricantes contendo cisplatina, doxorrubicina cloridrato e paclitaxel comercializados no Brasil. Foram analisados 14 lotes de cisplatina solução injetável de 4 fabricantes (laboratórios B, C, H e I), 15 lotes de doxorrubicina cloridrato pó liófilo injetável de 5 fabricantes (laboratórios C, F, G, H e J) e 38 lotes de paclitaxel solução injetável de 8 fabricantes (laboratórios A, B, C, D, E, F, G e H). Todos os produtos apresentaram resultados em conformidade com os critérios estabelecidos nas farmacopeias brasileira e americana. Os resultados de teores obtidos para cisplatina, doxorrubicina cloridrato e paclitaxel foram 94,3-105,9 %, 97,1-106,6 % e 90,2-109,4%, respectivamente. A análise estatística demonstrou que há equivalência entre produtos dos diferentes fabricantes avaliados.

Comparison of dissolution profile of extended-release oral dosage forms - two one-sided equivalence test

The aim of this work is to present the two one-sided test (TOST) as an alternative approach to compare dissolution profiles of extended-release dosage forms. The dissolution profiles of oxycodone extended-release tablets containing 10 mg, 20 mg and 40 mg (reference and generic) were evaluated according to the requirements described in United States Pharmacopeia. These dissolution profiles were compared using the conventional similarity factor (f2) and the proposed TOST as an equivalence test. TOST is a simple and alternative approach to compare dissolution profiles of extended-release dosage forms. It allows us to identify the time-point (or time-points) that did not show similarity. We concluded that the two one-sided test performed at a significance level of 5% and defined as D = 10 showed results comparable to those obtained by the conventional similarity factor (f2).

O objetivo deste trabalho é apresentar o teste uni-caudal duplo (TOST) como uma abordagem alternativa na comparação do perfil de dissolução de formas farmacêuticas de liberação prolongada. Os perfis de dissolução de comprimidos de liberação prolongada de oxicodona contendo 10 mg, 20 mg e 40 mg (genérico e referência) foram avaliados de acordo com os requisitos descritos na Farmacopeia Americana. Estes perfis de dissolução foram comparados empregando-se o fator de semelhança convencional (f2) e o método TOST como teste de equivalência. TOST é uma abordagem simples e alternativa para a comparação de perfis de dissolução de formas farmacêuticas de liberação prolongada. Este permite identificar o ponto (ou pontos) que não apresentou semelhança. Considerando-se D = 10, concluímos que o teste uni-caudal duplo num nível de significância de 5% apresenta resultados comparáveis àqueles obtidos com o fator de semelhança convencional (f2).

Critical analysis of the regulations regarding the disposal of medication waste

Expired or unused medication at people's homes is normally disposed of in normal garbage, sewage system or, in certain cases, returned to the public health system. There is still no specific legislation regarding this leftover medication to regulate and orient the handling and correct disposal of medication waste. However, there is defined regulation regarding health services' solid waste. This article has the objective of discussing management models for the disposal of medication waste and the recommendations made by pertinent national and international legislation. By means of literature reviews, the management structure for medication waste of international legislation and the regulations regarding the environment, as well as the national legislation for the solid waste from health services was analyzed. Through the analysis it was possible to present better clarifications as to the possible impacts to the environment, to the public's health and alternatives in order to obtain the efficient disposal of medication, reducing and/or avoiding sanitary risk, guaranteeing the quality and safety of public health.

As sobras de medicamentos oriundas do desuso ou da expiração do prazo de validade que constam nos domicílios da população, normalmente, são destinadas diretamente para o lixo comum, rede de esgoto ou, em alguns casos, devolvidas para a rede pública. Sobre essas sobras, ainda não há legislação específica que regulamenta e orienta sobre a manipulação e destinação correta do descarte dos resíduos de medicamentos. Entretanto, sobre os resíduos sólidos de serviços de saúde já se possui regulamentações definidas. O presente artigo tem como objetivo discutir modelos de gestão de descarte de resíduos de medicamentos e as recomendações de legislações internacionais e nacionais pertinentes. Por meio de revisão de literatura, analisou-se a estrutura do gerenciamento de resíduos para medicamentos de legislação internacional e as regulamentações relacionadas ao meio ambiente, assim como a legislação nacional de resíduos sólidos de serviços de saúde. Com a análise foi possível apresentar melhores esclarecimentos quanto aos possíveis impactos ao meio ambiente, à saúde da população e alternativas para se obter gestão eficaz de descarte de medicamentos, reduzindo e/ou evitando o risco sanitário, garantindo qualidade e segurança da saúde pública.

Antibiotic microbial assay using kinetic-reading microplate system / Ensaio microbiano antibiótico utilizando cinética de leitura de microplacas sistema

The aim of this study was to determine the optimal experimental conditions to develop a methodology for microbiological assay of apramycin employing microplate and kinetic reading mode, and to validate the developed method, through evaluation of parameters of selectivity, linearity, linear range, limits of detection and quantification, accuracy and precision. The turbidimetric assay principle is simple: the test solution is added to a suspension of test microorganism in culture media, the mixture is incubated under appropriate conditions and the microbial growth is measured by photometric reading. Microplate with kinetic reading mode employed in antibiotic assay is of considerable interest since it allows reduction of material and analysis time and enables a large number of samples to be analyzed simultaneously, with automated reading and calculating. Established conditions considered the standard-curve of apramycin at concentrations from 5.0 to 35.0 μg mL-1, and tryptic soy broth inoculated with 5 percent Escherichia coli (ATCC 8739) suspension. Satisfactory results were obtained with 2 hours of incubation. The developed method showed appropriate selectivity, linearity in the range from 5.0 to 35.0 μg mL-1, limits of detection and quantification of 0.1 and 0.4 μg mL-1, respectively, as well as satisfactory accuracy (recuperation = 98.5 percent) and precision (RSD = 6.0 percent). Microplate assay combined the characteristics of microbiological (evaluation of antibiotic activity against sensitive test microorganism) and physico-chemical (operationally straightforward and faster results) assays.

O objetivo deste trabalho é determinar as condições experimentais ideais para o desenvolvimento de metodologia para a dosagem microbiológica de apramicina empregando microplacas e modo de leitura cinético e validar o método desenvolvido, através da avaliação dos parâmetros de especificidade e seletividade, linearidade, faixa ou intervalo linear, limite de detecção e quantificação, exatidão e precisão. O ensaio turbidimétrico é simples: a solução-teste é adicionada à suspensão de microrganismo-teste em meio de cultura, a mistura é incubada em condições apropriadas e o crescimento microbiano é medido por meio de leitura fotométrica. O emprego de método de microplacas com leitura cínética para a dosagem de antibióticos é de interesse considerável, uma vez que possibilita reduzir quantidade de material e tempo de análise necessários e permite o ensaio de grande número de amostras simultaneamente, com leitura e cálculo automatizados. As condições estabelecidas abrangem curva-padrão de apramicina com concentrações entre 5 e 35 μg/mL, e emprego de meio de cultura caldo de triptona-soja inoculado com Escherichia coli (ATCC 8739) na proporção de 5 por cento. Foram obtidos resultados satisfatórios após 2 horas de incubação. O método desenvolvido apresentou especificidade e seletividade adequadas, linearidade na faixa de 5 a 35 μg/mL, limite de detecção e quantificação de 0,1 e 0,4 μg/mL, respectivamente, exatidão (recuperação = 98,5 por cento) e precisão (DPR = 6,0 por cento) satisfatórias. O ensaio em microplaca agrega características dos ensaios microbiológicos (avaliação da atividade do antibiótico frente a microrganismo-teste sensível) e físico-químicos (facilidade operacional e maior rapidez na obtenção dos resultados).

Determination of apramycin in oral soluble powder by a HPLC method using pre-column derivatization with o-phthalaldehyde and UV detection / Determinação da apramicina em pó solúvel oral por um método de HPLC utilizando pré-coluna de derivação com o de detecção de ftalaldeído e UV

A high-performance liquid chromatographic method employing pre-column derivatization with o-phthalaldehyde (OPA) and 2-mercaptoacetic acid was developed for the determination of apramycin, an aminoglycoside antibiotic used in veterinary medicine, in the oral soluble powder form. The chromatographic separation was done by ion-pair HPLC using a C18 reversed-phase column, Synergy Hydro (150 mm x 4.6 mm x 4 µm) and mobile phase composed of 0.005 mol/L sodium octanosulfonate in a mixture of acetonitrile: water: acetic acid (45:55:2) (v/v/v) with a flow rate of 1.0 mL/min; the UV detector was operated at 332 nm. The developed method was validated according to official compendia guidelines, having demonstrated robustness, selectivity and linearity for the concentration range of 0.02 to 0.05 mg/mL, precision (with RSD < 2.0 percent both for intra and inter-day precision) accuracy (average recuperation of 99.33 percent) and detectivity (quantification and detection limits of 0.08 and 0.02 µg/mL, respectively). Three batches of commercial apramycin oral soluble powder were analyzed by both the proposed method and the official microbiological method, where all the results obtained were in the acceptable range (95 percent to 105 percent of labeled value of apramycin). Both methods were statistically compared by the t test, which yielded no significant differences (α = 0.05) thereby confirming the equivalence of the methods.

Foi desenvolvido um método por cromatografia líquida alta eficiência empregando derivatização pré-coluna com o-ftalaldeído (OPA) e ácido mercaptoacético para determinação de apramicina, um antibiótico aminoglicosídeo de uso veterinário, em pó oral solúvel. A separação cromatográfica foi feita por fase reversa com pareamento iônico utilizando-se coluna Synergy Hydro C18 (150 x 4,6 mm x 4 µm) e fase móvel composta por octanossulfonato de sódio 0,005 mol/L em mistura de acetonitrila:água:ácido acético nas proporções 45:55:2 (v/v/v), numa vazão de 1.0 mL/min; efetuou-se detecção por UV a 332 nm. O método foi validado de acordo com os compêndios oficiais e demonstrou robustez, seletividade, linearidade na faixa de 0,02 a 0,05 mg/mL, precisão (com DPR < 2,0 por cento tanto para a precisão intra-dia quanto para a precisão inter-dia), exatidão (recuperação média de 99,33 por cento) e detectabilidade (limite de quantificação e de detecção iguais a 0,08 e 0,02 µg/mL, respectivamente). Analisaram-se 3 lotes de apramicina pó oral solúvel pelo método proposto e pelo método microbiológico oficial e todos os resultados obtidos estavam dentro do limite de aceitação (95 por cento-105 por cento valor rotulado de apramicina). Ambos os métodos foram comparados estatisticamente pelo teste t, não sendo encontradas diferenças significativas entre eles para α=0,05, sendo os dois equivalentes.

Evaluation of single-use reprocessed laparoscopic instrument sterilization / Avaliação da esterilidade do instrumental laparoscópico de uso único reprocessado / Evaluación de la esterilidad del instrumental laparoscópico descartable reprocesado

This experimental, comparative, laboratory study evaluated the effectiveness of the sterilization of single-use laparoscopic instruments - SULIs (grasper, dissector, scissors, Veress needle and electrosurgical probe system), after contamination-challenge with bacterial spores and sheep blood, and compared the results of the sterilization tests with those of the equivalent reusable instruments. The cleaning methods used were; ultrasonic washer with pulsatile water jet and enzymatic detergent, manual cleaning, cleaning with pressurized water and rinsing. The SULIs were sterilized with ethylene oxide and the reusable instruments in an autoclave. Sterility tests showed 100 percent negative results for recovery of contaminate microorganisms in both groups. It was concluded that, regarding the sterilization, that it is possible to reprocess SULIs.

O presente estudo, experimental, laboratorial e comparativo, teve como objetivo avaliar a eficácia da esterilidade dos instrumentos laparoscópicos de uso único (ILUU): grasper, dissector, tesoura, agulha de Veress e sistema de sonda de eletrocirurgia, após contaminação desafio com esporos bacterianos e sangue de carneiro, e comparar os resultados dos testes de esterilidade com aqueles dos instrumentos equivalentes "permanentes". Para limpeza, utilizou-se lavadora ultrassônica com jato pulsátil e detergente enzimático, limpeza manual, água sob pressão e enxágue. Os ILUUs foram esterilizados por óxido de etileno, os instrumentos "permanentes" em autoclave. Os testes de esterilidade acusaram resultados 100 por cento negativos para a recuperação dos micro-organismos contaminantes, nos dois grupos. Concluiu-se que, em relação ao alcance da esterilidade, é possível reprocessar ILUU.

Se trata de un estudio, experimental, de laboratorio y comparativo, que evaluó la eficacia de la esterilidad de los instrumentos laparoscópicos de uso único(ILUU): grasper, disector, tijera, aguja de Veres y el sistema de sonda electroquirúrgica, después de "contaminación desafío" con esporas bacterianas y sangre de carnero; los resultados de las pruebas de esterilidad fueron comparados con los de los instrumentos equivalentes "permanentes". Para efectuar la limpieza se utilizó: lavadora ultrasónica con chorro pulsante y detergente enzimático, limpieza manual, agua bajo presión y enjuague. Los ILUU fueron esterilizados con óxido de etileno, los instrumentos "permanentes" en autoclave. Las pruebas de esterilidad mostraron resultados 100 por ciento negativos para la recuperación de los microorganismos contaminantes en los dos grupos. Se concluye que, en relación al alcance de la esterilidad, es posible reprocesar los ILUU.

Evaluation of cytochrome P-450 concentration in Saccharomyces cerevisiae strains / Avaliação do citocromo P-450 na concentração de estirpes de Saccharomyces cerevisiae

Saccharomyces cerevisiae has been widely used in mutagenicity tests due to the presence of a cytochrome P-450 system, capable of metabolizing promutagens to active mutagens. There are a large number of S. cerevisiae strains with varying abilities to produce cytochrome P-450. However, strain selection and ideal cultivation conditions are not well defined. We compared cytochrome P-450 levels in four different S. cerevisiae strains and evaluated the cultivation conditions necessary to obtain the highest levels. The amount of cytochrome P-450 produced by each strain varied, as did the incubation time needed to reach the maximum level. The highest cytochrome P-450 concentrations were found in media containing fermentable sugars. The NCYC 240 strain produced the highest level of cytochrome P-450 when grown in the presence of 20 percent (w/v) glucose. The addition of ethanol to the media also increased cytochrome P-450 synthesis in this strain. These results indicate cultivation conditions must be specific and well-established for the strain selected in order to assure high cytochrome P-450 levels and reliable mutagenicity results.

Linhagens de Saccharomyces cerevisiae tem sido amplamente empregadas em testes de mutagenicidade devido à presença de um sistema citocromo P-450 capaz de metabolizar substâncias pró-mutagênicas à sua forma ativa. Devido à grande variedade de linhagens de S. cerevisiae com diferentes capacidades de produção de citocromo P-450, torna-se necessária a seleção de cepas, bem como a definição das condições ideais de cultivo. Neste trabalho, foram comparados os níveis de citocromo P-450 em quatro diferentes linhagens de S. cerevisiae e avaliadas as condições de cultivo necessárias para obtenção de altas concentrações deste sistema enzimático. O maior nível enzimático foi encontrado na linhagem NCYC 240 em presença de 20 por cento de glicose (p/v). A adição de etanol ao meio de cultura também produziu um aumento na síntese de citocromo P-450. Estes resultados indicam que as condições de cultivo devem ser específicas e bem definidas para a linhagem selecionada, garantindo assim elevados níveis de citocromo P-450 e, conseqüentemente, a confiabilidade nos testes de mutagenicidade.

Comparison of three experimental designs employed in gentamicin microbiological assay through agar diffusion / Comparação de três modelos experimentais empregados no ensaio microbiológico de gentamicina por difusão em ágar

Gentamicin is a broad-spectrum antibiotic complex produced by actinomycetes belonging to Micromonospora genus and classified among aminoglycoside antibiotics, used in the treatment of serious infections derived from Gram-negative microorganisms. Alterations of their antimicrobial activity not shown in chemical assays can be evaluated through microbiological assays. The aim of this work was to compare 5 x 1, 2 x 2 and 3 x 1 experimental designs, evaluating validation parameters of specificity, linearity, range, precision, and accuracy for each experimental design in different levels of concentration, presentation, and lots. It consisted of 81 assays (in 3 replicas) of gentamicin microbiological dosage. The concentrations of the solutions used were employed in a range from 1.0 μg/mL to 5.0 μg/mL, diluted in phosphate buffer 0.1 M pH 8.0. Antibiotic medium number 11 was used, with Staphyloccocus epidermis (ATCC 12228). 21ml of medium were used as base layer and 4 ml of medium inoculated at 1 percent were used as surface layer. The dishes were incubated for 18 hours at 37 ± 1 ºC. The three designs employed showed adequate specificity for analysis of dermatological cream and injectable solution containing gentamicin sulphate. They also showed accuracy and linearity in the range evaluated, but not a significant difference concerning precision. The results were compared by means of the determination of the rates of measurement system capacity. The statistical analysis demonstrated that there is no significant difference among the results obtained through 5 x 1, 2 x 2, and 3 x 1, being these equivalent and interchangeable.

A gentamicina é um complexo antibiótico de largo espectro, produzido por actinomicetos do gênero Micromonospora e classificado entre os antibióticos aminoglicosídeos, utilizado no tratamento de infecções graves, devidas a microrganismos Gram-negativos. Alterações da sua atividade antimicrobiana, não demonstradas pelos ensaios químicos, podem ser avaliadas pelos ensaios microbiológicos. O objetivo deste trabalho foi comparar os delineamentos experimentais 5 x 1, 2 x 2 e 3 x 1, avaliando-se os parâmetros de validação de especificidade, linearidade, faixa ou intervalo, precisão e exatidão para cada delineamento experimental em diferentes níveis de concentração, apresentações e lotes. O plano de trabalho constituiu-se na realização de 81 ensaios (em 3 réplicas) de doseamento microbiológico de gentamicina. As concentrações das soluções empregadas foram preparadas numa faixa de 1,0 μg/mL a 5,0 μg/mL, diluídos em tampão fosfato 0,1 M pH 8,0. O meio utilizado foi o meio antibiótico no. 11, com Staphyloccocus epidermidis (ATCC 12228). Empregou-se 21 mL de meio como camada base e 4 mL de meio inoculado à 1 por cento como camada superfície. As placas foram incubadas por 18 horas à 37 ± 1 ºC. Os três delineamentos empregados apresentaram especificidade adequada para análise de creme dermatológico e solução injetável contendo sulfato de gentamicina. Também apresentaram exatidão e linearidade no intervalo avaliado. Os delineamentos não apresentaram diferença significativa quanto a precisão. Os resultados foram comparados através da determinação de índices de capacidade do sistema de medição. A analise estatística demonstrou que não há diferença significativa entre os resultados obtidos pelos delineamentos 5 x 1, 2 x 2 e 3 x 1, sendo equivalentes e intercambiáveis.

Determinação da segurança biológica do xampu de cetoconazol: teste de irritação ocular e avaliação do potencial de citotoxicidade in vitro / Determination of the biological reactivity of ketoconazole in shampoo: draize eye test and cytotoxity test

Cetoconazol é um agente antifúngico, que pode ser incorporado em diferentes formas farmacêuticas, como, por exemplo, xampus e cremes. O objetivo do trabalho foi avaliar a segurança biológica in vivo (teste de irritação ocular) e in vitro (teste de citotoxicidade) do xampu de cetoconazol degradado sob ação da luz. Para tanto, a formulação foi exposta à radiação UV-C (254 nm) e foram empregados dois métodos para a determinação quantitativa do cetoconazol: CLAE e ensaio microbiológico. Os resultados demonstraram alteração do cetoconazol em presença da luz - presença de picos secundários no cromatograma e diminuição da atividade antifúngica - entretanto, não demonstraram alteração na segurança biológica entre xampu de cetoconazol e xampu de cetoconazol contendo produtos de degradação.

Ketoconazole is an antifungal agent and can be incorporated into several dosage forms, as an example it could be mentioned shampoos and creams. The aim of this work was to assess the biological reactivity in vivo (Draize eye test) and in vitro (cytotoxity test) of ketoconazole in shampoo degradeted under action of light. The formulation was exposed to UV-C (254 nm) radiation and two methods were used for the quantitative determination of ketoconazole: HPLC and microbiological assay. The results showed alteration in ketoconazole in presence of light - secondary peaks in chromatogram and decrease in antifungal activity - however, no alteration on the biological reactivity between ketoconazole shampoo and ketoconazole shampoo containing degradation products was observed.